Primer dimer artifacts սովորաբար տեղի են ունենում մեծ շեմային ցիկլի համարով (սովորաբար > 35 ցիկլ), որն ավելի բարձր է, քան ցանկալի ամպլիկոնի շեմային ցիկլի համարը: Նախաներկի դիմերները զգալիորեն ավելանում են, երբ ավելացվում է հետերոլոգ գենոմային ԴՆԹ:
Որտե՞ղ կտեսնեք պրայմերային դիմերներ ԴՆԹ գելի վրա:
Ոչ քանակական վերջնակետի PCR-ում պրայմեր դիմերը կհայտնվի ագարոզայի գելի վրա քիչ թե շատ թույլ քսուքի տեսքով՝ հետաքրքիր արտադրանքի գոտուց ցածր:
Ինչպե՞ս են առաջանում այբբենարանի դիմերները:
Պայմերային դիմերները ձևավորվում են երբ երկու այբբենարան կապվում են միմյանց հետ ձևանմուշի ԴՆԹ-ի փոխարեն՝ այբբենարանի կոմպլեմենտարության շրջանների պատճառով:
Ինչպե՞ս եք հայտնաբերել այբբենարանի դիմերները:
Պայմեր-դիմերների առկայությունը ստուգելու ամենահեշտ ձևը ն է՝ համեմատել ձեր ռեակցիաները ձեր բացասական վերահսկողության հետ (ջուր՝ ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի փոխարեն): Բացասական հսկողության մեջ դեռ կձևավորվեն այբբենարանի դիմերներ: Որոշ այբբենարաններ ավելի հավանական է, որ դիմերներ ձևավորեն, քան մյուսները:
Ինչու են առաջանում այբբենարանի դիմերները:
Հիմնականում պրայմերային դիմերներ են դիտվում ՊՇՌ ռեակցիայի խառնուրդում այբբենարանի բարձր կոնցենտրացիայի պատճառով: Կամ եթե չկա PCR ուժեղացում, և դուք կարող եք տեսնել պրայմերային դիմերի վրա ագարոզայի գելի մեջ: Եթե դուք կարող եք տեսնել PCR արտադրանքը, ապա կարող եք նվազեցնել պրիմի կոնցենտրացիան և պահպանել մնացած պայմանները նույնը:
