Տրիպսինացումը բջիջների տարանջատման գործընթացն է՝ օգտագործելով տրիպսինը՝ պրոտեոլիտիկ ֆերմենտ, որը քայքայում է սպիտակուցները՝ կպչուն բջիջները տարանջատելու այն նավից, որտեղ դրանք մշակվում են: Բջջային մշակույթին ավելանալիս տրիփսինը քայքայում է սպիտակուցները, որոնք բջիջներին թույլ են տալիս կպչել անոթին:
Ինչու ենք մենք տրիպսինացնում բջիջները:
Տրիպսինացումը հաճախ կատարվում է թույլտվության համար բջիջների անցումը նոր տարա, փորձարկման համար դիտում կամ կոլբայի մեջ միաձուլման աստիճանի նվազեցում տոկոսի հեռացման միջոցով: բջիջները։
Ինչպե՞ս է աշխատում տրիպսինը բջիջները անջատելու համար:
Trypsin/EDTA-ն բջիջների անջատման համակցված մեթոդ է: Տրիպսին կտրում է կպչուն սպիտակուցները բջջ-բջջ և բջջ-մատրիքս փոխազդեցություններում՝ կտրելով կպչուն սպիտակուցների ամինաթթուները հատուկ լիզինում կամ ագինինում՝ C-տերմինալում, եթե վերին հոսանքով ամինաթթուն-ը պրոլին չէ:
Ինչպե՞ս եք ստանում տրիպսինացված կպչուն բջիջներ:
ընթացակարգ
- Հեռացրեք միջավայրը կուլտուրայի անոթից ասպիրացիայի միջոցով և լվացեք միաշերտը Ca2+ և Mg առանց աղի լուծույթով: 2+ շիճուկի բոլոր հետքերը հեռացնելու համար: …
- Տրիպսին կամ տրիփսին/EDTA լուծույթը տարածեք կուլտուրայի անոթ(ների) մեջ, որպեսզի ամբողջությամբ ծածկի բջիջների միաշերտը և տեղադրեք 37 °C ինկուբատորում ~2 րոպե:
Ինչպե՞ս կարող եմ անջատել տրիպսինը բջջային կուլտուրայում:
Երբ բջիջները հայտնվեն անջատված, ավելացրեք 2 հատորնախապես տաքացված ամբողջական աճի միջավայր՝տրիպսինը ապաակտիվացնելու համար: Մեղմորեն ցրե՛ք միջավայրը՝ մի քանի անգամ պիպետավորելով բջջի շերտի մակերեսի վրա՝ ապահովելու բջիջների >95%-ի վերականգնումը: Շիճուկից զերծ կուլտուրաների համար սոյայի տրիփսինի ինհիբիտորը (Արտադրանք No.
