Նախ, և՛ EcoR1-ը, և՛ Xba1-ը ԴՆԹ-ն մարսելիս թողնում են 5' ելուստներ (ինչպես և Nde1): Երկու դեպքում էլ 3' ծայրը փորված է, ինչի պատճառով պոլիերմազան կարող է հիմքեր ավելացնել: Երկրորդ, բոլոր պոլիմերազները կարող են հիմքեր ավելացնել միայն 3' ծայրին, այնպես որ Klenow-ը կավելացնի 4 հիմք երկու տեղամասերի հետացած 3' ծայրին՝ բութ ծայրեր առաջացնելու համար::
Սահմանափակող ֆերմենտները թողնում են 5 ֆոսֆատ:
Վեկտորները և ներդիրները, որոնք մարսվում են սահմանափակող ֆերմենտներով, պարունակում են անհրաժեշտ տերմինալ փոփոխություններ (5' ֆոսֆատ և 3' հիդրոքսիլ), մինչդեռ պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (PCR) արդյունքում ստեղծված բեկորները չեն կարող:
Հնարավո՞ր է բութ ծայրերը կապել:
Բութ ծայրով կապակցում
Բութ ծայրի կապակցումը չի ներառում դուրս ցցված ծայրերի հիմքերի զուգավորում, ուստի ցանկացած բութ ծայրը կարող է կապվել մեկ այլ բութ ծայրի հետ: Բութ ծայրերը կարող են առաջանալ սահմանափակող ֆերմենտների կողմից, ինչպիսիք են SmaI-ը և EcoRV-ը:
Taq պոլիմերազը բութ ծայրեր է առաջացնում:
Այո… Taq Polymerase-ն ավելացնում է A-Overhangs, եթե դուք պահպանում եք վերջնական երկարացման քայլը 72 dC-ում PCR-ով: Հիմնականում օգտագործվում է TA կլոնավորման համար:
Ինչու՞ օգտագործել Klenow հատվածը ԴՆԹ-ի հաջորդականության մեջ:
Կլենոուի հատվածը չափազանց օգտակար է հետազոտությունների վրա հիմնված առաջադրանքների համար, ինչպիսիք են. Լրացնելով ԴՆԹ-ի բեկորների հեռացած 3' ծայրերը, որպեսզի 5' բութ երեսպատումը լինի : Մարսում է դուրս ցցված 3' ելուստները.
