Երբ բջիջները հայտնվում են անջատված, ավելացրեք 2 հատոր նախապես տաքացված ամբողջական աճի միջավայր՝ տրիպսինն ապաակտիվացնելու համար: Մեղմորեն ցրե՛ք միջավայրը՝ մի քանի անգամ պտտելով բջջի շերտի մակերեսի վրա՝ ապահովելու բջիջների >95%-ի վերականգնումը:
Ինչպե՞ս դադարեցնել տրիպսինի ակտիվությունը:
Տրիպսինի մարսումը կարող է դադարեցվել սառեցնելով կամ նվազեցնելով pH-ի pH-ը pH 4-ից ցածր՝ ավելացնելով մկանային, քացախային կամ տրիֆտորաքացախաթթու (տրիպսինը կվերականգնի ակտիվությունը, երբ pH-ը բարձրանում է pH 4-ից): Մարսված նմուշները կարող են պահվել -20°C ջերմաստիճանում:
Ի՞նչն է չեզոքացնում տրիպսինը:
Կալցիումի և մագնեզիումի իոններ պարունակող բուֆերը նույնպես կդանդաղեցնի տրիփսինի ակտիվությունը: Այնուամենայնիվ, FBS-ը տրիփսինի ակտիվությունը արգելակելու ավելի արդյունավետ միջոց է:
Արդյո՞ք շիճուկն ապաակտիվացնում է տրիպսինը:
Շիճուկն ապաակտիվացնում է մնացորդային տրիպսինը, որը մնացել է երիկամների ֆերմենտային մարսումից և պրոտեոլիտիկ ֆերմենտներից, որոնք հետագայում սինթեզվում են բջիջների կողմից: Թարմ տրիպսինացված բջիջները կարող են վերածվել միաշերտների՝ շիճուկի բացակայության դեպքում, պայմանով, որ դրանք բազմիցս լվացվեն՝ մնացորդային տրիպսինը հեռացնելու համար:
Որքա՞ն մեդիա է պահանջվում տրիպսինն անջատելու համար:
Քանի դեռ դուք օգտագործում եք առնվազն 1:1 հարաբերակցությամբ 5-10% շիճուկպարունակող միջավայր ձեր տրիպսինի հետ, պետք է լինի ավելի քան բավարար արգելակում, որին հաջորդում է ցենտրիֆուգումը: և միջին փոխանակում թարմ միջավայրի հետ։
